ELISA試劑盒方法被廣泛應用于各種抗原和抗體測定，具有靈敏度高，操作簡單等優點，但是在具體實驗過程中影響因素較多，并且要按照嚴格的說明要求，在檢驗中除正常反應外，有時常可見到一些錯誤結果（即假陽性或假陰性結果） 影響ELISA測定錯誤結果的原因主要包括3類：標本因素、試劑因素以及操作因素。
其中標本因素對ELISA測定的影響做如下總結。
一、類風濕因子
人血清中IgM、IgG型類風濕因子（RF）可以與ELISA系統中的捕獲抗體及酶標記二抗的FC段直接結合，從而導致假陽性。
解決辦法
1.用F（ab）2替代完整的IgG；
2.標本用聯有熱變性（63℃，10 min）IgG的固相吸附劑處理（將熱變性IgG加入到標本稀釋液中同樣有效）；
3.檢測抗原時，可以用2-巰基乙醇等加入到標本稀釋液中，使RF降解。
二、補體
ELISA系統中固相一抗和標記二抗過程中，抗體分子發生變構，其FC段的補體C1q分子結合位點被暴露出來，使C1q 可以將二者連接起來，從而造成假陽性。
解決辦法
1.用EDTA稀釋標本；
2.用53℃，10 min或56℃，30 min加熱血清使C1q滅活。
三、嗜靶抗原的自身抗體
抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的自身抗體，有時能與靶抗原結合形成復合物，在ELISA方法中均可干擾抗原抗體測定結果。
解決辦法
測定前需用理化方法將其解離后再測定。
四、嗜異性抗體
人類血清中含有能與嚙齒類動物（如鼠等）Ig（s） 結合的天然嗜異性抗體，可將ELISA系統中一抗和二抗連接起來，也能造成假陽性。
解決辦法
可在標本稀釋液中加入過量的動物Ig（s），但加入量不足或亞類不同時無效。
